Взятие крови из яремной вены у свиней

Методы отбора проб крови у свиней для лабораторных исследований

Кровь – жидкая ткань организма, выполняющая ряд функций, одной из которых является транспортная. Осуществляя в организме транспорт химических веществ, происходит интеграция биохимических процессов в различных клетках и межклеточных пространствах в единую систему. Правильно отобранные образцы крови предоставляют возможность мониторинга нозологического профиля поголовья, уровня метаболических процессов, обеспеченности организма витаминами, минералами, незаменимыми аминокислотами и т.д. Для получения достоверных результатов необходимо свести к минимуму возможность появления артефактов, обусловленного нарушением правил отбора проб крови, ее стабилизирования и транспортировки.

Иглы перед взятием крови от каждого животного обязательно стерилизуют кипячением, либо применяют стерильные. Оптимальным вариантом является использование шприц-пробирок или вакуумных пробирок. При их использовании кровь не контактирует с внешней средой, т.е. остается асептической и не подвергается окислению кислородом воздуха, тем самым предупреждается агрегация тромбоцитов и образование сгустков в образцах, предназначенных для полного определения клеточного состава крови. Место пункции необходимо обработать 70%-ным спиртовым раствором или 3%-ным раствором карболовой кислоты. При заборе крови нужно следить, чтобы она стекала по стенке в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, быстрее гемолизируется и часто дает неправильные результаты показаний при лабораторных исследованиях.

Таблица 1. Влияние гемолиза на результаты исследований биохимических компонентов сыворотки крови

Существует несколько способов отбора проб крови у свиней. Среди них можно выделить:

Данный способ подходит, если необходимо отобрать небольшое количество крови (2-3 мл). Для асептического отбора используется шприц с иглой толщиной 0,8 мм (типа Луер), и отбор крови осуществляется при внутривенном введении иглы, в противном случае происходит бакобсемененность образца. Вены уха свиньи, как правило, расположены в трех точках уха и легко различимы. Одна вена располагается вдоль внешнего края уха, другая – посередине, третья – около 2 см от медиального края. Хвостовые вены находятся в вентральной части хвоста. Для этого способа взятия крови требуются иглы 0,8х25 мм.

После отбора крови необходимо удалить иглу, а место пункции пережать лещеткой, лигатурой или большим пальцем руки на 2-3 минуты. Опасность метода состоит в том, что лигатура может произвольно соскочить и произойдет обескровливание организма животного.

Это безопасный и быстрый способ отбора крови, требующий правильной фиксации животного. Для этого используют металлическую петлю или веревку, при помощи которых животное фиксируется в стоячем положении. При фиксации голова поросенка должна быть поднята вверх таким образом, чтобы шея образовала прямую линию, а кожа была натянута.

Отбор крови производят с правой стороны (при дыхательной недостаточности, развивающейся у свиней при пневмонии или плевропневмонии возможно при введении иглы повреждение левого диафрагмального или блуждающего нерва, поэтому рекомендуется введение иглы справа). Точка пункции находится на краю плечеголовной мышцы – внешнего края яремного желоба, на линии между краем плечевого сустава и рукояти грудной кости (рис 1, 2). Вторая линия проходит от рукояти грудной кости к основанию уха. Глубина прокола для взрослых животных составляет от 75 до 100 мм, для маленьких поросят – 40-75 мм.

Рис. 1. Поверхностные мышцы шеи свиньи

Рис. 1.1. Сеть венозных сосудов шеи

Рис. 2. Место пункции яремной вены

Рис. 3. Забор крови из яремной вены

После введения иглы под кожу поршень шприц-пробирки необходимо отвести назад для создания в ней отрицательного давления. Игла вводится в дорсомедиакаудальном направлении (рис. 3). Когда кровь начинает поступать в пробирку, необходимо следить, чтобы она не вспенивалась, не капала, не билась о дно, а плавно стекала по стенке – с целью предупреждения гемолиза эритроцитов.

Если игла с первого раза не попала в яремную вену, ее необходимо отвести назад и вводить в слегка измененном произвольном направлении. Если и в этот раз цель не достигается, иглу необходимо заменить. При наличии кровотечения после извлечения иглы, место пункции необходимо прижать большим пальцем руки до ее полной остановки.

Свиней массой о С, исключая воздействие света и тепла. Если сыворотка будет исследована позже, в течение недели или на следующей неделе, ее необходимо заморозить при -20 о С и исследовать сразу же после разморозки.

Таким образом, если целью отбора крови является получение достоверных результатов, необходимо четко следовать методическим требованиям при отборе, хранении и транспортировке проб. В современных условиях (насыщенности ветеринарной программы, удаленности лаборатории от производства, отсутствия необходимого инвентаря и оборудования) этого сделать практически невозможно. Поэтому при интерпретации полученных из лаборатории результатов, необходимо учитывать все факторы, которые могут на них повлиять. Четкой границы, дифференцирующей патологию от физиологической нормы, у свиней не существует. На полученные из лаборатории результаты можно ориентироваться, но 100% им доверять нельзя.

Взятие крови из яремной вены у свиней

Безопасные методы отбора проб крови у свиней. Постановка правильного диагноза – одна из важнейших составляющих в мероприятиях по профилактике и борьбе с заболеваниями животных.

Попадая в организм хозяина, возбудитель независимо от патогенности запускает механизмы гуморальной (продукции антител) и клеточной защиты. Образующиеся специфические антитела попадают главным образом в кровь, и там их можно определить с помощью серологических реакций в течение периодов разной продолжительности, при некоторых инфекциях – в течение всей жизни животного.

Исследование сыворотки с соответствующим лабо-раторным диагностическим антигеном дает реакцию при условии, что сыворотка содержит специфические антитела. Определение антител к данному возбудителю доказывает лишь наличие контакта исследуемого объекта с этим агентом и ничего не говорит о том, когда этот контакт имел место (неделю, год или много лет назад) и каков был его характер – перенесение заболевания, инфекция без клинических проявлений или, наконец, вакцинация. Таким образом, серологическое обследование больного субъекта даже в случае определения высоких титров антител к определенному возбудителю не всегда позволяет утверждать, что именно этот возбудитель является причиной наблюдаемого заболевания. Оно может быть вызвано совершенно другим микроорганизмом или паразитом, а присутствие антител в сыворотке служит доказательством перенесенного в прошлом заражения, например бессимптомного, что может в некоторых случаях обусловливать невосприимчивость как раз к этому же заболеванию.

В большинстве случаев диагностическая ценность серологических реакций зависит от уверенности в том, что обнаруженные антитела появились в ответ на текущее заражение или при правильно выполненной программы вакцинации.

В хозяйстве, с учетом анамнеза, клинических и патологоанатомических данных можно установить предварительный диагноз заболевания, но окончательный диагноз заболевания устанавливается в основном при наличии данных лабораторных исследований. Для получения более достоверного диагноза желательно исследовать парные пробы сывороток крови, что позволит выявить нарастание титра антител и свидетельствовать о свежем заражении животного. Первый раз кровь берут как можно раньше после обнаружения заболевания (желательно – в течение первых 4-5 дней после появления первых симптомов или возникновения первых подозрений), второй раз – спустя 14 дней. Диагностическая лаборатория сохраняет присланные первые образцы сыворотки крови, взятой в острой фазе болезни, в замороженном состоянии до получения второй сыворотки, взятой в период реконвалесценции, и только тогда может быть поставлена серологическая реакция, так называемое исследование парных сывороток (каждая пара должна быть взята от одного животного).

Положительным результатом реакции, указывающим на течение острого процесса заражения данным возбудителем, является четырехкратное увеличение титра антител за период между первым и вторым взятием проб крови на исследование. Применение в реакции постоянной дозы сыворотки и изменяющегося количества возбудителя должно дать рост индекса нейтрализации не менее 1,7-2,0 lg, что соответствует 50-100-кратному возрастанию титра.

Если первая проба взята слишком поздно, то титр антител может достигнуть такого уровня, что второе исследование не выявит четырехкратного возрастания титра. Если же взять вторую пробу слишком рано (интервал между пробами должен быть не менее 10 дней), титр антител не успевает достигнуть максимального уровня, и разница вновь окажется слишком незначительной. Это говорит о том, что вовремя и правильно отобранные пробы крови от животных – залог правильного диагноза заболевания.

Отбор крови из яремной вены у мелкого и крупного рогатого скота не представляет затруднений для ветеринарных специалистов. Поэтому мы хотим обратить внимание на методы отбора крови у свиней, общие правила, их недостатки и преимущества.

При отборе крови необходимо руководствоваться принципом «не навреди себе, животному, окружающей среде» и обеспечить лабораторию качественным материалом для постановки достоверного диагноза. Работа должна выполняться согласно правилам гуманного обращения с животными в соответствии с руководством по здоровью и защите животных.
У свиней кровь отбирают из сосудов ушной раковины; кончика хвоста; глазного синуса; передней полой вены.

1) Свинья должна быть надежно зафиксирована за верхнюю челюсть с помощью веревочной петли или петли из гибкого тонкого тросика, что обеспечит безопасность берущего кровь и предохранит от травмы свинью (рис. 1);

2) Вся посуда и инструменты должны быть стерильными;

Рис. 1. Фиксация свиньи

1) Врач должен владеть методами отбора крови и исключать контакт с кровью во время взятия и приготовления сыворотки;

2) Нельзя допускать попадания крови на пол, на персонал и тело свиньи с целью предупреждения распространения возможной инфекции;

3) Во избежание нежелательной контаминации крови микрофлорой кожу на месте взятия крови необходимо очистить от грязи и продезинфицировать 70% спиртом или 5% настойкой йода;

4) Остановить вытекание крови прижиганием раны порошком сухого марганцовокислого калия или наложением лигатуры, которую потом необходимо снять;

5) Получить качественную сыворотку крови, пригодную для исследования и получения достоверного результата.

Кровь отбирают в стерильные пробирки, шприцы или специальные одноразовые шприцы типа «Моновет». Для лучшего отстаивания сывороток стенки традиционно используемых пробирок и шприцов до взятия крови необходимо увлажнить стерильным физраствором.

«Моновет» – это готовая к употреблению закрытая система взятия крови, состоящая из шприца-пробирки и иглы. В игле и шприце-пробирке устроены клапаны, предотвращающие вытекание крови при отсоединении иглы от шприца-пробирки, что снижает риск инфицирования окружения. В самом шприце-пробирке находятся пластиковые шарики с нанесенным активатором свертывания крови (или наоборот, в зависимости от модели и цели взятия крови), благодаря чему кровь быстро свертывается и образуется четкая граница между сгустком и сывороткой. Устройство можно применять для вакуумного или шпри- цевого метода отбора крови. При отборе в шприц-пробир- ку набирается постоянное количество крови, что позволяет центрифугировать кровь в «Моновете» без уравновешивания. Также система «Моновет» является прекрасным транспортным контейнером.

Для взятия крови из ушной вены сначала подготавливают поверхность кожи уха. Для этого удаляют грязь, выстригают щетину и дезинфицируют место прокола. Вокруг уха накладывают резиновый жгут, который необходимо снять после завершения процедуры взятия крови. Для взятия крови иглу № 16 вводят в вену, отбирают кровь в шприц и переливают в стерильную пробирку (рис. 2). Отбор крови в пробирку методом разрезания уха применяться не должен.

Рис. 2. Взятие крови из ушной вены

Для взятия крови из сосудов хвоста кончик хвоста обмывается и дезинфицируется 70% раствором спирта или 5% раствором йода. Кончик хвоста отсекают скальпелем (рис. 3) и берут необходимое количество крови в пробирку. После окончания процедуры на хвост накладывают лигатуру, прижигают 5% раствором йода или сухим порошком марганцовокислого калия. Через 1-2 часа необходимо удалить лигатуру с хвоста для предупреждения возможного некроза тканей.

Рис. 3. Взятие крови из сосудов хвоста

Образцы крови могут быть получены из глазного синуса свиней (рис. 4). Взрослых свиней надежно фик-сируют стоя, а поросят-сосунов удерживают одной рукой в горизонтальном положении. Кончик иглы, соединенной со шприцом, вводят непосредственно в ткани мигательной перепонки. При введении Иглу необходимо направлять вниз с небольшим нажимом, наклоняя внутрь. Иглу продвигают вперед на 2-4см, пока она не попадет в венозный синус, который примыкает к костной глазной впадине (схема 3). Срез иглы должен быть направленным в сторону кости. При прокалывании тканей синуса кровь начнет вытекать из иглы. При необходимости повторное взятие крови рекомендуется проводить через 10-12 дней.

Рис. 4. Взятие крови из глазного синуса

Отбор крови возможен и из передней полой вены.
У больших свиней кровь берут в положении стоя. Для этого иглу длиной 6 см направляют справа или слева от киле- видного хряща грудины на линии, проведенной от месторасположения хряща к основанию уха. Иглу направляют внутрь, вверх и обратно (схема 1).

Схема 1. Взятие крови из передней полой вены у больших свиней, зафиксированных в положении стоя

Для отбора крови в положении свиньи на спине (схема 2) иглу 20-го размера длиной 3,8 см направляют внутрь, вниз и обратно до тех пор, пока она не попадет в вену внутри дугообразного образования между двумя первыми ребрами.

Схема 2. Взятие крови из передней полой вены у крупных свиней, зафиксированных в положении на спине (А – анатомия вентрального шейного отдела свиньи; 1 -грудина; 2 – внешняя яремная вена; 3 -лицевая вена; 4 – челюстной край; 5 – верхнечелюстная вена; В -место введения иглы шприца для взятия крови).

Схема 3. Взятие крови из глазного синуса свиней
(1 – боковой угол глазной щели – нижнее веко; 2 – средний угол глазной щели – нижнее веко; 3 – игла для взятия крови после введения ее в глазничный венозный синус; 4 – третье веко и его лимфатический узел (окружающий хрящ); 5 – глазничный венозный синус; 6 – глубоко расположенный лимфатический узел третьего века; 7 – срединная костная стенка глазного синуса; 8 – зрительный нерв; 9 – обонятельная луковица; 10 -решетчатая кость и носовые раковины; 11 – дополнительная точка для взятия крови).

Автор: Вабишевич Ф.С., Дудников Л.A., НПП «Био-Тест-Лаборатория»

Памятка по взятию крови для серологического исследования

В своей практической деятельности ветеринарным специалистам при выполнение плана противоэпизоотических мероприятий, а также при исключении тех или иных инфекционных заболеваний приходится проводит взятие проб крови от животных. При этом у лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов, оленей, овец и коз кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи. Иглы для взятия крови обязательно стерилизуются кипячением. Кровь берется от каждого животного отдельной иглой. В последние годы забор крови от животных проводится вакуумными пробирками или одноразовыми шприцами из подхвостовой вены.

1. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригается, кожа дезинфицируется 70% спиртом.

2. При взятии крови специалист должен следить, чтобы кровь стекала по стенке пробирки струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизируется и часто дает неправильные результаты показаний при исследовании. Во время взятия крови ветспециалист должен следить, чтобы кровь не попадала в кормушку и на землю. Для этого ветспециалист при взятие крови из вены должен пользоваться тазиком с дезинфицирующей жидкостью, куда спускают первую порцию крови.

У свиней кровь берется из уха (иглой или шприцем) или из кончика хвоста. Хвост перед взятие крови обмывают водой с мылом и дезинфицируют 70% спиртом, затем кончик отрезают ножницами. После взятия крови кончик хвоста обрабатывают йодом, перевязывают или прижигают.

У птиц кровь берут из вены крыла или гребешка. Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животного.

3. Объем: Для серологического исследования от крупных животных кровь берут в количестве 7-10мл, а от мелких животных в объеме 2-4мл.

4. Взятую кровь выдерживают около часа при температуре 30-35 градусов для свертывания, а затем выносят в прохладное помещение для отстаивания.

5. Сроки доставки: сыворотка крови должна быть доставлена в ветлабораторию, в течение первых суток. И в исключительных случаях не позднее третьего дня после ее взятия.

6. При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом ее необходимо консервировать 5%-ным раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9мл сыворотки 1мл раствора карболовой кислоты или 1-2капли раствора на 1мл сыворотки.

Сыворотку можно консервировать также высушиванием. Для высушивания сыворотку наносят на фильтровальную бумагу размером 5*5см в количестве 0,4мл и выдерживают в комнате при рассеянном свете до полного высыхания. После этого на каждой бумаге с высушенной сывороткой делают соответствующие записи карандашом и завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), а затем упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию.

7. Для серологического исследования в лабораторию особенно от вблизи расположенных хозяйств можно отправлять и цельную кровь, не отделяя сыворотку, но при условии, что в пути ее не будут встряхивать и она не подвергнется гемолизу.

8. Маркировка: на каждой пробе сыворотки крови или крови указывают ее порядковый номер, инвентарный номер животного (кличку животного, фамилию владельца животного).

9. Оформление: к сопроводительному письму на пробы крови, направляемые в плановом порядке для серологического или гематологического исследования, прилагается опись проб в 2-х экземплярах. Смотри приложение №1. (doc)

10. Упаковка и транспортировка: Пробирки с кровью или сывороткой плотно закрывают стерильными пробками и устанавливают для пересылки в строго вертикальном положении (на лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «осторожно-стекло!» и «Верх»). Зимой кровь и сыворотку упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали.

Источники:

http://konsulagro.by/articles/metodyi-otbora-prob-krovi/

http://zoovet.info/veterinarnye-stati/91-infektsionnye-bolezni-zhivotnykh/413-bezopasnye-metody-otbora-prob-krovi-u-svine

http://vetvo.ru/pamyatka-po-vzyatiyu-krovi-dlya-serologicheskogo-issledovaniya.html